细菌耐药问题日益突出，新型抗菌化合物研发、现有抗菌药物药敏评价、药物联合抑菌策略研究已经成为微生物与药学领域重要研究方向。体外抑菌效果评估最常用方法为微量肉汤稀释法，传统依靠肉眼观察孔内浑浊程度判定MIC，人为误差大，仅能得到终点定性结果，无法获取细菌全过程生长动力学信息。
酶标仪通过测定菌悬液浊度对应的光密度OD值，将细菌生长程度进行数字化定量，能够批量检测96孔微孔板，获得终点抑菌数据与时间‑生长曲线，提升药敏实验客观性与通量。博清生物WKB‑96酶标仪具备光学检测、自动板位进出、内置温控、配套数据分析软件，适配微生物药敏实验需求。
一、材料与仪器
（一）实验菌株
大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923，‑80 ℃甘油保藏，实验前复苏传代2次，保证菌株活性。
（二）试剂与耗材
MH 肉汤培养基；受试抗菌药物；无菌 96 孔透明平底微孔板；0.5 麦氏比浊管；无菌 PBS 缓冲液；0.22 μm 无菌滤器。
（三）主要仪器
博清生物WKB‑96微孔板酶标仪；恒温培养箱；高速离心机；超净工作台；麦氏比浊仪。WKB‑96酶标仪采用线性PMT检测技术，吸光度检测范围0‑4.0 OD，波长可选400‑700 nm，支持终点读数与动力学连续检测，自带微孔板自动校准，检测结果变异系数CV＜1.5%，支持原始数据导出、抑菌率自动计算，适配微生物浊度检测场景。
二、实验方法
（一）菌悬液制备
挑取复苏后单菌落接种MH肉汤，37℃振荡培养至对数生长期；使用MH肉汤调节菌悬液浊度至0.5麦氏浊度，再稀释，使微孔板内最终接种菌浓度约5×105 CFU⋅mL−1，符合CLSI药敏实验接种标准。
（二）抗菌药物倍比稀释与微孔板加样
采用二倍梯度稀释法配制抗菌药物系列浓度，在96孔板内每孔加入100μL梯度药物溶液，再加入100 μL标准化菌悬液。设置实验组、阳性生长对照（菌液 + 无药培养基）、阴性空白对照（仅MH肉汤培养基），每组设置3个生物学平行；若药物有机溶剂溶解，增设溶剂对照组，排除溶剂抑菌干扰。封板膜密封微孔板，减少培养过程水分蒸发。
（三）棋盘法联合抑菌评价
针对两种抗菌药物协同作用研究，采用棋盘微量稀释法，两种药物分别沿行、列梯度稀释，酶标仪读取终点OD值，计算FICI分数抑制浓度指数，评判协同、相加、无关、拮抗效应。
（四）重复性验证
同一批次微孔板设置6组平行；分3个独立批次重复实验，统计MIC结果一致性，计算OD检测变异系数，评估博清WKB‑96酶标仪检测重复性。
三、结果与分析
（一）单药MIC定量检测结果
博清WKB‑96酶标仪OD定量结果与肉眼判读MIC结果基本吻合。仪器数字化OD输出可以区分部分肉眼难以分辨的弱生长现象，避免肉眼误判。平行样本OD检测CV值＜1.5%，重复性良好。阴性对照组OD稳定，证明无杂菌污染；阳性对照组OD显著升高，证明菌株生长状态正常，实验体系有效。
传统肉眼仅能得到“生长/不生长”定性结果；酶标仪可输出连续抑菌率数值，能够观察亚MIC浓度下细菌部分生长抑制现象，便于评估药物剂量‑效应关系。
（二）细菌生长动力学曲线分析
动力学模式下，仪器实时记录不同药物浓度下细菌OD随时间变化。高浓度抗菌药物组OD全程维持在低水平，细菌几乎无增殖；亚抑菌浓度组依然可见细菌生长，但迟滞期延长、最大OD降低，直观反映药物对细菌增殖的延缓效应。该数据是终点读数无法获取，可用于解析药物抑菌作用模式。
（三）药物联合抑菌检测
棋盘法微孔板经WKB‑96酶标仪批量读数，软件导出矩阵OD数据，快速计算各组FICI指数，高效完成药物协同抑菌筛选，相比逐孔肉眼判读，大幅降低大批量联合用药实验工作量。
（四）仪器应用优势分析
博清生物WKB‑96酶标仪应用于抗菌药物抑菌评估具备多项优势：
1、高通量：单次完成96样本检测，适配药物库大规模初筛；
2、客观定量：输出OD数值与抑菌率，消除人为主观偏差，原始数据可保存，便于论文归档；
3、支持动力学监测，解析细菌完整生长过程，拓展药敏实验维度；
4、自动化进出仓，内置校准，操作流程简洁，适配常规微生物实验室；
5、兼容通用96孔透明微孔板，无特殊封闭耗材限制，降低实验成本。
四、讨论
抗菌药物体外抑菌评估，是抗菌新药开发、耐药菌药理研究的基础实验。传统微量肉汤稀释法肉眼判读操作简便，但存在固有短板：对于部分弱抑制、轻微浑浊孔，不同实验人员判读结果存在差异，且只能获取孵育终点结果，丢失细菌生长动态信息。
博清生物WKB‑96酶标仪将浊度信号转化为数字化OD值，实现MIC定量判定，同时可开展动力学生长曲线测定，能够观察亚抑菌浓度下细菌增殖变化，适合单药药效评价、多药联合筛选、耐药菌株表型分析等科研场景。实验过程中应当注意：必须设置严格空白、阳性对照；微孔板选择透明平底；控制孵育过程水分蒸发；菌液接种浓度严格标准化，保障数据可靠性。
本研究也发现，浊度法酶标仪检测只能反映菌体数量，无法区分活菌与死菌，若需要测定最小杀菌浓度MBC，仍需要结合平板涂布菌落计数方法。酶标仪终点OD结果与平板计数结果互相补充，可以更加全面评价抗菌药物抑菌与杀菌活性。
国产酶标仪在微生物药敏领域的普及，能够降低科研平台设备采购门槛。博清WKB‑96酶标仪整套方案可用于药物筛选、天然产物抗菌活性评价、分离菌株药敏初筛，为抗菌相关生物科研提供稳定可靠的检测平台。
本文基于博清生物WKB‑96酶标仪结合微量肉汤稀释法，成功建立标准化抗菌药物抑菌效果体外评估体系。该平台可高通量完成MIC测定、抑菌率计算、细菌生长动力学分析、联合用药棋盘法评价，检测重复性好，规避肉眼判读主观误差，原始数据可留存，适合抗菌药物基础科研、药物初筛等工作。在细菌耐药形势严峻背景下，该检测方案可为新型抗菌物质研发、抗菌药理机制研究提供有力技术支撑。
