益生菌发酵过程伴随复杂的物质转化，发酵上清液中的代谢产物直接决定菌株益生潜力，包括胞外多糖（EPS）、ACE抑制肽、自由基清除活性物质、糖苷酶、群体感应信号分子 AI-2 等，在免疫调节、肠道屏障保护、抗氧化、血糖调节等方向具备研究价值。在菌株筛选与发酵工艺优化实验中，需要对不同菌株、不同发酵时间梯度样品进行多指标检测，传统分光光度计单管检测操作繁琐、样品消耗量大，平行样品之间误差较高，难以满足大批量样品筛查。
微孔板酶标仪是现代生物实验室高通量检测核心设备。博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96酶标仪集成高性能光学检测系统，支持发光检测、荧光检测，内置温控模块（室温～45℃），可在微孔板内完成原位孵育，适配益生菌发酵产物多种比色、荧光检测方法，一次完成96个样品同步测定，降低人为操作误差，适合益生菌发酵动力学监测与活性组分定量。
一、材料与方法
（一）材料与仪器
供试菌株：植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌；MRS液体培养基；苯酚、浓硫酸、DPPH、pNPG底物等分析纯试剂；96孔透明微孔板。
检测设备：博清生物WKB-96酶标仪，高速冷冻离心机，超净工作台，恒温培养箱。
（二）样品制备
益生菌接种于MRS培养基，37℃静置发酵。分别在0、4、8、12、16、20、24h取样，发酵液5000r/min 离心10min，0.22μm滤膜过滤，获得无细胞发酵上清液（CFS），置于4℃保存备用。
（三）检测项目与方法
1、菌体生长曲线测定：将发酵菌液稀释后加入96孔板，使用博清生物酶标仪在600nm测定OD值，监测菌体浓度随发酵时间变化，绘制生长曲线。
2、胞外多糖（EPS）定量（苯酚 - 硫酸法）：取发酵上清，经醇沉、透析获得多糖样品。微孔板中加入样品、苯酚与浓硫酸，室温显色，酶标仪490nm读取吸光度，葡萄糖标准曲线计算多糖含量。
3、DPPH 自由基清除活性测定：发酵上清与DPPH甲醇溶液在微孔板混合，避光反应，517nm测定吸光度，计算自由基清除率，评价发酵产物抗氧化能力。
4、α- 葡萄糖苷酶抑制活性测定：微孔板体系加入缓冲液、底物pNPG、发酵上清与α- 葡萄糖苷酶，37℃板内孵育，终止反应后405nm读数，计算酶抑制率，评估发酵产物降糖相关活性。
5、β- 葡萄糖苷酶活力检测：以pNPG为底物，发酵上清粗酶液进行酶促反应，终止后405nm检测吸光度，计算发酵产物中β- 葡萄糖苷酶活力。
（四）仪器性能验证
采用博清生物WKB-96酶标仪自带自动校准程序，完成光路校准。同一标准样品设置8个平行孔检测，计算吸光度变异系数CV，评估检测重复性；梯度浓度标准品检测，验证检测线性范围。
二、结果与分析
（一）仪器检测稳定性
博清生物WKB-96酶标仪对同一样品平行孔检测，吸光度CV＜3%，检测结果稳定，孔间差异小，满足益生菌发酵产物平行样品统计分析要求。内置温控模块可维持微孔板内反应温度稳定，实现酶促反应原位孵育与读数，省去转移样品步骤，减少温度波动带来的实验误差。仪器支持自定义波长设置，405、490、517、600nm等常用波长可快速切换，一套微孔板平台完成发酵体系多指标检测。
（二）益生菌生长动力学监测
利用酶标仪600nm连续读数，获得植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌完整生长曲线。可清晰区分延滞期、对数期、稳定期，快速对比不同菌株增殖速率。相比传统分光光度计，微孔板体系可一次性设置多个菌株、多个时间梯度，大幅减少样品用量与操作时间，适合大量益生菌菌株初筛。
（三）发酵产物活性组分定量分析
苯酚 - 硫酸法多糖检测结果显示，菌株胞外多糖产量随发酵时间先升高后降低，在发酵20h达到峰值；DPPH抗氧化实验证明发酵上清具备自由基清除能力，活性随菌体生长逐步积累；α- 葡萄糖苷酶抑制实验表明部分菌株发酵产物具有较强抑制活性。博清生物酶标仪稳定捕获显色体系吸光度变化，标准曲线线性良好，可实现胞外多糖、活性代谢物准确定量。
（四）应用优势讨论
在益生菌发酵科研场景中，博清生物酶标仪优势体现在：①高通量，单块96孔板同时处理多菌株、多平行、多浓度样品；②微量检测，仅需几十微升发酵上清，减少发酵培养工作量；③一体化温控孵育，支持酶活、抑制活性等需要恒温反应的功能评价实验；④一机多用，吸光度、荧光检测模式可拓展至免疫因子、荧光标记代谢物检测，覆盖益生菌、后生元大部分体外活性评价实验。
相较于大型色谱设备，酶标仪适合发酵过程快速筛查，优先完成菌株初筛、发酵条件梯度优化；阳性样品再转入HPLC等设备开展精细组分鉴定，形成高效分层研究方案。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96酶标仪可稳定应用于益生菌发酵产物的高通量分析，能够完成益生菌生长监测、胞外多糖定量、抗氧化活性、糖苷酶抑制活性、胞外酶活力等多项指标检测。仪器光学稳定性良好、孔间误差低，微孔板微量检测模式显著降低试剂与样品消耗，提升益生菌菌株筛选、发酵工艺优化的实验效率，是益生菌、后生元、微生物发酵实验室的基础核心检测设备，在肠道微生物、食品生物、发酵工程相关科研领域具备良好应用前景。
