橄榄油，尤其是特级初榨橄榄油，因富含单不饱和脂肪酸、多酚等活性物质，具有较高营养与经济价值，是食用植物油掺假高发品类。当前橄榄油掺假手段日趋隐蔽，简单依靠脂肪酸组成、折光指数等理化指标容易出现误判，难以区分近源性油脂掺混；而DNA分子标记技术依靠物种特异性基因序列进行鉴定，不受油脂理化性质变化影响，是国际粮油真伪溯源的重要发展方向。
橄榄油压榨过程中，大部分植物细胞破碎，核酸大量降解，油脂基质会强烈抑制PCR扩增，常规手工提取方法操作繁琐、有机溶剂污染大、批次间差异显著，低掺假样品极易出现提取失败、假阴性结果，限制分子检测技术在食品安全检疫中的推广应用。磁珠法核酸提取技术依靠磁性微球特异性吸附核酸，可自动完成裂解、结合、洗涤、洗脱全流程，适合复杂食品基质的核酸纯化。博清生物科技（南京）有限公司研发的核酸提取仪针对食品复杂基质优化磁珠吸附体系，可批量处理橄榄油样品，减少人为操作误差。
一、材料与方法
（一）仪器与试剂
博清生物核酸提取仪；微量紫外分光光度计；荧光定量PCR仪；高速冷冻离心机；涡旋振荡器。
食品基质磁珠核酸提取试剂盒；橄榄油物种特异性引物（橄榄叶绿体rbcL基因，菜籽油、大豆油、玉米油物种特异性引物）；qPCR扩增试剂盒；特级初榨橄榄油、精炼橄榄油、菜籽油、大豆油、玉米油样品；梯度掺假样品（在纯橄榄油中按体积比掺入1%、5%、10%、20%菜籽油）。
（二）样品前处理
取橄榄油样品，采用有机相乳化富集方法，离心分离水相，收集含植物核酸沉淀，转入博清生物核酸提取仪配套样本板。设置仪器提取程序：裂解、磁珠结合、多步洗涤去除脂类与多酚杂质、核酸洗脱，全程自动化运行。提取完成后，采用微量分光光度计测定 DNA 浓度与OD₂₆₀/OD₂₈₀，评价核酸纯度。
（三）PCR扩增与真伪鉴别
以提取得到的DNA为模板，采用叶绿体rbcL基因进行扩增，结合HRM熔解曲线分析，根据熔解温度差异区分橄榄、油菜、大豆、玉米等物种来源；同时设置空白对照、纯橄榄油阳性对照、外源油脂对照，评估体系特异性。
（四）方法学验证
分别对不同掺假比例样品、不同储存周期橄榄油样品进行平行提取检测，考察方法检出限、重复性、抗基质干扰能力。对比博清生物提取与传统手工硅胶柱提取的DNA得率、纯度以及PCR扩增成功率。
二、结果与分析
（一）博清生物核酸提取仪对橄榄油样品核酸提取效果
橄榄油样品核酸含量极低，基质中大量脂溶性多酚为强PCR抑制物。博清生物核酸提取仪配套食品专用磁珠体系，通过多阶段洗涤步骤有效去除油脂与酚类杂质。检测结果显示，提取产物OD₂₆₀/OD₂₈₀稳定在1.7~2.0区间，蛋白、多糖残留低；与手工提取相比，博清生物设备提取批次间CV显著降低，低核酸含量样品扩增成功率明显提升，有效解决手工提取重复性差的痛点。
（二）掺假样品检出限与特异性验证
qPCR-HRM结果显示，该检测体系可稳定检出橄榄油中≥1% 的菜籽油掺假；纯橄榄油样品仅出现橄榄特异性熔解峰，掺假样品可同时检出外源油脂特征熔解曲线，无交叉非特异性扩增，特异性良好。对于货架期较长、核酸降解程度高的橄榄油样品，博清生物核酸提取仪依然能够回收短片段残留核酸，保障扩增反应顺利进行，适配市场流通各类橄榄油样品检测。
（三）大批量检疫样品适用性评价
博清生物核酸提取仪支持高通量样本并行处理，单批次可同时处理多份橄榄油样品，操作人员仅需完成样本加样，其余纯化流程自动化完成，大幅缩短样品前处理时长，降低气溶胶与交叉污染风险，更适合市场抽检、口岸食品安全检疫大批量样品筛查场景。
三、讨论
橄榄油真伪分子检测的核心难点不在于PCR扩增环节，而在于复杂油脂基质中微量降解核酸的高效纯化。油脂、多酚类物质会抑制Taq酶活性，造成扩增失败，这也是很多实验室橄榄油DNA检测假阴性的主要原因。传统手工提取操作步骤多，有机溶剂使用量大，人员操作水平直接影响提取结果，难以标准化，不适合检疫机构常规检测。
博清生物核酸提取仪通过自动化磁珠纯化方案，针对食品基质优化裂解与洗涤程序，有效去除橄榄油中脂类、多酚等抑制物，稳定回收微量残留核酸，实现橄榄油样品核酸前处理标准化。该设备与qPCR、HRM、DNA条形码技术联用，可实现橄榄油物种真伪鉴定、外源油脂掺假定性与半定量筛查。相较于理化检测，该分子检测方案物种分辨能力更强，可识别同属近缘品种掺伪，为橄榄油产地溯源、品种鉴定提供技术基础。
本研究也发现，深度精炼橄榄油中核酸破坏程度极高，核酸检出难度显著高于初榨橄榄油，在后续检测工作中，可进一步优化样品富集方案，结合高拷贝叶绿体基因引物，进一步提升精炼油脂掺假检出能力。
博清生物科技（南京）有限公司研发的核酸提取仪可高效完成橄榄油复杂基质中的核酸纯化，去除油脂、多酚等PCR抑制物，提取核酸满足后续荧光定量PCR及高分辨率熔解曲线分析要求。该检测体系检出限可达1%外源油脂掺假，特异性强、重复性佳，自动化高通量特性适配食品安全、出入境检疫大批量橄榄油真伪筛查工作。博清生物核酸提取仪为食用油掺假分子鉴别提供标准化前处理工具，助力完善食用植物油质量安全监管技术体系，保障橄榄油市场秩序与食品安全。
