细胞分泌功能是细胞对外界刺激产生应答、实现细胞间信息交流的核心生理功能，细胞分泌的细胞因子、蛋白介质、活性小分子等物质的含量与活性，直接反映细胞的生理状态、代谢水平及功能活性，是细胞生物学、免疫学、药理学研究的核心检测指标之一。在炎症机制探究、抗肿瘤药物筛选、干细胞功能评估、免疫细胞活性分析等研究领域，精准定量检测细胞分泌产物水平，是阐明细胞功能调控机制、评价实验干预效果的关键前提。
目前实验室常用的细胞分泌检测方法主要包括酶联免疫吸附法、分光光度法、常规荧光酶标法等。其中，酶联免疫吸附法操作流程繁琐、孵育时长较长，批量检测效率低下；传统分光光度法检测灵敏度有限，难以识别细胞微量分泌产物的差异；常规荧光检测设备样品消耗量大，微量细胞上清样本无法完成有效检测，极大限制了低通量、微量样本细胞分泌实验的开展。因此，开发快速、微量、高精度的细胞分泌功能检测技术，对提升细胞功能研究的准确性和效率具有重要意义。
博清生物科技（南京）有限公司研发的YQG-01X荧光计是一款紧凑型高精度荧光定量检测设备，具备微量样品检测、快速响应、高灵敏度、低误差等技术优势，可适配微量核酸、荧光标记蛋白、活性小分子等生物样本的精准定量检测，在生命科学基础研究中具备广阔应用前景。
一、材料与方法
（一）实验材料与仪器
1、实验细胞：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7。
2、主要试剂：DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素双抗、脂多糖（LPS）、荧光标记炎症因子（TNF-α）检测试剂盒、PBS缓冲液、细胞裂解液，所有试剂均符合细胞实验级标准。
3、核心仪器：博清生物YQG-01X紧凑型荧光计、CO₂细胞培养箱、超净工作台、高速低温离心机、倒置显微镜、恒温水浴锅。其中博清生物YQG-01X荧光计核心参数：样品检测体积1~20μL，检测时长≤5s，具备高精度光学检测模块，可实现荧光信号精准采集与定量分析，抗环境干扰能力强。
（二）细胞培养与模型构建
将RAW264.7细胞置于含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素双抗的DMEM高糖培养基中，于37℃、5%CO₂恒温培养箱中常规培养，待细胞融合度达80%~90%时进行传代处理。将对数生长期细胞接种于细胞培养板中，分为空白对照组与模型实验组，每组设置3个复孔。对照组常规培养，实验组采用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞24h，诱导细胞炎症分泌活化，构建细胞分泌功能异常模型。培养结束后，收集各孔细胞上清液，低温离心去除细胞碎片，获得待测样本。
（三）荧光标记样本制备
严格按照荧光标记TNF-α检测试剂盒说明书操作，取各组细胞上清待测样本，与特异性荧光探针充分混匀，避光孵育30 min，使探针与细胞分泌的TNF-α特异性结合，形成稳定荧光复合物。孵育完成后，采用PBS缓冲液轻微洗涤去除未结合探针，制备得到可用于荧光定量检测的标记样本，全程避光操作避免荧光淬灭。
（四）基于YQG-01X荧光计的检测方法优化
开启博清生物YQG-01X荧光计，预热30 min完成设备自检与基线校准，设置仪器激发波长488 nm、发射波长526 nm，匹配本实验荧光探针光谱特性。为验证设备微量检测优势，分别设置5μL、10μL、15μL、20μL四个样品体积梯度，每组样本重复检测5次。检测时吸取待测样本置于检测孔中，设备自动采集荧光信号并输出定量数值，记录各组荧光强度数据，同时采用传统荧光酶标仪进行平行对照检测，对比两种设备的检测效果。
二、实验结果
（一）样品用量对检测结果的影响
不同样品体积下YQG-01X荧光计检测结果显示，5~20μL样品体积范围内，设备均可稳定采集荧光信号，无信号缺失、数值溢出等异常情况。其中5μL微量样品即可获得清晰稳定的荧光检测数值，相较于传统酶标仪需50μL以上样品用量，样品消耗量降低80%以上。当样品体积为10~20μL时，检测数值波动极小，变异系数CV<1.2%，检测稳定性最佳，后续实验确定最优样品检测体积为10μL。该结果充分体现YQG-01X荧光计微量样品检测的核心优势，可有效节约珍贵细胞上清样本，适用于微量细胞分泌样本的检测分析。
（二）快速检测性能验证
实验计时结果显示，博清生物YQG-01X荧光计单样本从信号采集到数据输出全程耗时仅3~5s，完成96例批量样本检测耗时不足10min。而传统荧光酶标仪单样本检测耗时15~20s，同等批量样本检测需30min以上，检测效率提升3倍以上。同时，快速检测模式下设备无明显信号衰减，荧光强度数值稳定，未出现因检测时长导致的荧光淬灭误差，证实该设备可满足高通量、快速化细胞分泌功能检测需求。
（三）细胞分泌功能定量检测结果
采用优化后的检测参数，对空白对照组与LPS刺激实验组RAW264.7细胞的TNF-α分泌水平进行定量检测，结果显示：对照组细胞上清荧光强度为（28.36±2.15），实验组荧光强度为（89.72±3.68），实验组荧光强度显著高于对照组（P<0.01），提示LPS可显著诱导巨噬细胞炎症因子分泌，细胞分泌功能显著活化，实验模型构建成功。
平行对照检测结果表明，YQG-01X荧光计检测结果与传统酶标仪检测结果趋势完全一致，且组内数据差异更小、灵敏度更高，可精准捕捉细胞分泌产物的微量差异，对低浓度细胞分泌因子的检测辨识度显著优于传统设备。
（四）检测重复性与稳定性分析
对同一待测样本进行10次重复检测，YQG-01X荧光计检测数值变异系数CV=0.98%，远低于传统检测设备（CV=2.35%），检测重复性优异。连续3d重复性实验显示，设备日间检测误差<1.5%，无明显数据漂移，设备光学系统稳定性良好，可满足长期、多次细胞分泌功能动态监测实验的精度要求。
三、讨论
细胞分泌功能检测是解析细胞生理病理机制的重要技术手段，检测设备的灵敏度、精度、检测效率直接决定实验数据的可靠性与实验效率。传统检测技术受限于设备原理，存在样品消耗大、检测速度慢、微量信号识别能力弱等短板，难以适配现代细胞生物学精细化、高通量、微量样本的研究需求。本研究通过系统实验证实，博清生物YQG-01X荧光计凭借其独特的光学检测设计与微量检测技术，可完美适配细胞分泌功能定量检测场景。
相较于传统检测设备，YQG-01X荧光计的核心应用优势体现在三个方面。其一，微量样品适配性强，1~20μL超微量样品即可完成精准检测，极大节约了细胞培养上清、原代细胞分泌样本等珍贵实验材料，解决了低细胞量样本无法检测的难题。其二，检测高效精准，5秒极速检测模式兼顾效率与精度，高灵敏度光学模块可精准识别低浓度荧光信号，有效捕捉细胞分泌功能的细微变化，适合药物梯度干预、时间梯度动态监测等精细化实验。其三，稳定性与重复性优异，设备抗环境干扰能力强，组内、组间检测误差小，数据可信度高，可有效降低实验系统误差，提升实验重复性。
本研究以巨噬细胞炎症分泌模型为研究对象，验证了设备在细胞因子分泌检测中的应用价值，该检测体系可进一步拓展至免疫细胞、肿瘤细胞、干细胞等多种细胞的分泌功能检测，适配生长因子、炎症介质、功能性分泌蛋白等多种荧光标记产物的定量分析。同时，该设备操作简便、体积小巧，无需复杂调试，可无缝对接常规细胞实验流程，无需额外改造实验体系，具备极强的实验通用性与场景适配性。
本研究成功建立了基于博清生物YQG-01X荧光计的细胞分泌功能荧光定量检测体系，证实该荧光计可高效、精准、稳定地完成细胞分泌活性物质的定量检测。该设备具备微量样品检测、极速检测、高灵敏度、高重复性的显著优势，能够精准区分不同干预条件下细胞分泌功能的差异，检测性能优于传统荧光检测设备。博清生物科技（南京）有限公司研发的YQG-01X荧光计可广泛应用于各类细胞分泌功能研究实验，为细胞生理功能解析、病理机制探究、药理药效评价提供可靠的技术支撑，在细胞生物学、免疫学、药理学等生命科学研究领域具备重要的应用价值和推广前景。
