生长因子（GFs）通过结合细胞膜表面特异性受体，启动下游 Ras/MAPK、PI3K/Akt、TGF-β/Smad 等信号级联反应，精准调控细胞命运与组织稳态。通路激活程度的定量检测是解析生理病理机制、筛选靶向药物的关键环节。传统检测方法（如 Western blot、qRT-PCR）存在通量低、操作繁琐、定量误差大等局限，难以满足大规模样本与动态监测需求。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96酶标仪，集成线性 PMT 检测、双激发光源补偿及共聚焦检测技术，支持化学发光多模式检测，具备高灵敏度（100 pg/mL）、宽动态范围、优异重复性（＜3%）及精准温控（室温 - 45℃） 等核心优势，完美适配生长因子信号通路中细胞增殖、激酶活性、报告基因表达及蛋白定量等多维度检测需求，已成为生物科研领域的主流设备之一。
一、博清生物WKB-96酶标仪的核心技术优势
（一）多模式集成检测，适配通路多指标分析
WKB-96化学发光（CLIA）、光激化学发光（LiCA）、时间分辨荧光（TRF）三种检测模式，可一站式完成信号通路相关的细胞活力、酶活性、蛋白浓度及基因表达检测：
化学发光模式：无背景干扰，灵敏度达pg/mL级，适用于双荧光素酶报告基因、激酶活性等弱信号检测；
温控与振板功能：室温- 45℃精准控温，适配酶促反应动力学与细胞孵育需求。
（二）高通量与高精准度，保障实验可靠性
1、高通量检测：兼容 96 孔板，6-12 秒完成整板读取，单次可同步检测数十样本，大幅提升通路激活的动态监测效率；
2、高灵敏度与重复性：采用共聚焦技术抑制交叉干扰，最低检出限达 100 pg/mL，孔间重复性＜3%，确保低丰度磷酸化蛋白、细胞因子等指标的准确定量；
3、自动化流程：自动进出仓、开机自检校准，搭配流程式控制软件，可一键完成标准曲线拟合、数据归一化与通路激活率计算，减少人为误差。
二、在生长因子介导信号通路激活研究中的核心应用
（一）细胞增殖与活力检测，评估通路激活的功能效应
生长因子（如 FGF2、NGF）通过激活 MAPK/ERK 通路促进细胞增殖，WKB-96 可通过 CCK-8、MTT 等方法定量检测增殖活性，间接反映通路激活水平。
实验方案（以 FGF2 诱导骨髓间充质干细胞 hBMSCs 为例）：
1、细胞接种：hBMSCs 以 4×10³ 细胞/孔接种于 96 孔板，培养 24h 至贴壁；
2、分组处理：设置对照组（基础培养基）、FGF2 梯度组（5、10、20 ng/mL），培养 24、48、72h；
3、CCK-8 检测：每孔加入 10 μL CCK-8 试剂，37℃孵育 1h；
4、WKB-96 检测：450nm 波长读取吸光度（OD 值），细胞活力 =（实验组 OD - 空白 OD）/（对照组 OD - 空白 OD）×100%；
5、结果分析：FGF2 浓度与 OD 值呈显著正相关（P＜0.05），20 ng/mL FGF2 处理 72h 后细胞活力达对照组 1.8 倍，提示 MAPK/ERK 通路显著激活。
（二）信号通路关键激酶活性检测，直接量化通路激活程度
激酶磷酸化是信号通路激活的核心标志，WKB-96 通过ELISA 法、激酶活性试剂盒定量检测 ERK、Akt、Smad2/3 等关键分子的磷酸化水平，直接反映通路激活强度。
实验方案（TGF-β1/Smad 通路检测）：
1、细胞处理：肝星状细胞 LX-2 经 5 ng/mL TGF-β1 处理 0.5、1、2、4h，提取总蛋白；
2、磷酸化蛋白检测：采用 p-Smad2/3 ELISA 试剂盒，按说明书包被抗体、封闭、加样、孵育；
3、WKB-96 检测：450nm 读取 OD 值，通过标准曲线计算 p-Smad2/3 浓度；
4、结果：TGF-β1 处理 1h 后 p-Smad2/3 浓度达峰值（较对照组升高 2.3 倍），4h 后回落，呈现典型的时间依赖性激活特征。
（三）双荧光素酶报告基因检测，解析通路转录激活机制
将通路特异性启动子（如 SBE、AP-1）与荧光素酶报告基因连接，生长因子激活通路后，启动子驱动报告基因表达，WKB-96 化学发光模式可灵敏检测荧光素酶活性，量化转录激活水平。
实验方案（FGF2/FGFR1 通路转录活性检测）：
1、质粒转染：Cal27 细胞转染含 AP-1 启动子的双荧光素酶报告质粒（海肾荧光素酶为内参）；
2、生长因子刺激：转染 24h 后，加入 10 ng/mL FGF2 处理 6、12、24h；
3、发光检测：裂解细胞，加入荧光素酶底物，WKB-96 化学发光模式检测萤火虫与海肾荧光强度；
4、数据分析：以萤火虫/海肾荧光强度比值表示转录活性，FGF2 处理 12h 后比值升高 3.1 倍，证实 FGF2 通过激活 AP-1 转录因子调控下游基因表达。
（四）通路抑制剂筛选与药效评价
WKB-96 的高通量特性可支持大规模生长因子通路抑制剂筛选，通过检测细胞活力、激酶活性或报告基因表达变化，评估药物对通路激活的抑制效果。
应用案例：在 FGF2/MAPK 通路抑制剂筛选中，对 120 种小分子化合物进行梯度浓度处理，WKB-96 同步检测 96 孔板中细胞活力与 p-ERK 水平，最终筛选出 2 种可显著抑制通路激活（IC₅₀＜1 μM）且无明显细胞毒性的候选药物，为肿瘤靶向治疗提供候选分子。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96酶标仪凭借多模式集成、高灵敏度、高通量、自动化等核心优势，完美适配生长因子介导信号通路激活研究中细胞增殖、激酶活性、转录调控及药物筛选等多维度检测需求，有效解决传统方法通量低、误差大、操作繁琐等痛点，为生物科研领域解析信号通路机制、研发靶向药物提供关键技术支撑，具有重要的科研价值与广阔的应用前景。
