食品在生产、储运过程易被致病性微生物污染，部分致病菌在食品基质中增殖并分泌耐热毒素，常规加热灭菌手段无法完全破坏毒素，摄入后极易引发食物中毒事件，对公共卫生安全构成威胁。传统分离培养鉴定技术需要增菌、分离、生化鉴定，检测周期2～5d，难以实现大批量样品快速筛查。PCR核酸检测可实现快速定性，但无法直接区分活菌与毒素，且样品基质抑制效应明显。
酶联免疫吸附法（ELISA）基于抗原 - 抗体特异性识别，结合酶促显色反应，依靠微孔板检测仪测定吸光度值，建立毒素浓度与OD值的标准曲线，实现毒素定量检测，是当前食品中毒素筛查应用最广泛的技术手段PMC。ELISA检测结果高度依赖酶标仪光学系统稳定性、孔间均一性、读数重复性，仪器噪声、孔位交叉干扰会直接造成假阳性或定量偏差。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96微孔板酶标仪采用线性PMT光电检测与光源补偿技术，兼容比色、荧光多检测模式，支持自动进出板、开机自检校准，温控区间室温至45℃，适配ELISA孵育与读数一体化实验需求。
一、材料与仪器
（一）实验材料
SEB、Stx毒素标准品；抗SEB捕获抗体、HRP标记检测抗体；TMB显色底物、ELISA终止液；脱脂牛奶、猪肉、即食沙拉等空白食品基质；微孔洗涤液；96孔高结合力聚苯乙烯微孔板。
（二）仪器设备
博清生物WKB-96酶标仪；微孔板洗板机；恒温孵育箱；高速组织均质器；离心机；移液工作站。
二、实验方法
（一）样品前处理
固体食品样品经均质、磷酸盐缓冲液浸提，离心去除蛋白沉淀与基质残渣；液态乳制品直接稀释，过滤去除杂质，获得样品待测上清液，采用加标法配制不同毒素浓度梯度样品，同时设置空白基质对照。
（二）夹心ELISA检测流程
微孔板包被捕获抗体，4℃过夜；洗涤后加入封闭液封闭非特异性结合位点；依次加入毒素标准品/样品上清、酶标记检测抗体，37℃孵育；洗板去除未结合组分，加入TMB底物避光显色；孵育完成加入硫酸终止反应。使用博清生物WKB-96酶标仪，选择双波长模式（450nm主波长，630nm参比波长）读取各孔OD值，仪器内置终点法采集模块，7s完成整块96孔板读数，自动导出吸光度数据，配套软件自动拟合标准曲线，计算样品中毒素浓度。
（三）方法学评价指标
配制系列毒素标准溶液，测定OD值，绘制标准曲线，计算线性相关系数；设置低、中、高3个浓度水平，板内、板间重复测定，计算变异系数CV评估重复性；进行基质加标回收实验；开展特异性试验，考察黄曲霉毒素、赭曲霉毒素等干扰物的交叉反应；同时与传统微生物分离鉴定方法进行比对。
三、结果与分析
（一）标准曲线与检出限
在选定浓度范围内，毒素浓度对数与OD值呈现良好线性关系，R²＞0.992。依托WKB-96稳定光学系统，基线噪声低，可实现ng级检出，满足食品安全国标限量筛查要求。仪器光源补偿技术降低孔间光强差异，有效减少边缘孔效应，提升低浓度样品定量可靠性。
（二）重复性与精密度
低、中、高浓度样品板内重复CV＜2.6%，板间重复性CV＜3.8%。WKB-96每次读板前自动自检与动态范围校准，降低长期实验漂移，长时间连续检测多块微孔板时，读数稳定性无明显衰减，适合科研批量样本检测。
（三）基质加标回收结果
牛奶、肉制品、即食食品基质样品加标回收率86.2%～107.5%。复杂食品基质中蛋白、脂肪会带来背景干扰，仪器采用双波长扣除基质背景，显著降低食品基质本底吸光度带来的定量误差，提升复杂样品检测准确度。
（四）特异性与方法比对
交叉反应试验显示，仪器检测体系对其他真菌毒素、无关细菌抗原无明显响应，特异性良好。与微生物分离培养法比对，阳性、阴性样品结果一致性较高，WKB-96配套ELISA方法检测速度远快于传统培养，适合大量样品初筛。
四、讨论
食品基质组分复杂，脂肪、蛋白质、色素等会带来背景吸光干扰，是ELISA检测中造成结果偏差的关键因素。博清生物WKB-96酶标仪双波长读数模式可有效扣除微孔板、样品基质本底，线性PMT检测单元拥有动态检测范围，高浓度样品不会快速饱和，高低浓度毒素样品均可精准定量；设备自带温控模块，可直接在板内完成孵育，减少微孔板转运过程温度波动，减少实验误差；自动化进板、快速读数、配套数据分析软件，降低人工读数记录带来的人为误差，大幅提升科研实验效率。
相比单一滤光片酶标仪，WKB-96支持多检测模式拓展，除常规比色ELISA外，后续可开发荧光ELISA、时间分辨免疫检测方案，同一台设备满足致病菌、毒素多类型检测科研需求，适配高校、研究院所、第三方检测实验室多课题并行研究场景。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96酶标仪光学稳定性强、检测精密度高、通量高，可稳定应用于食品基质中金黄色葡萄球菌肠毒素、志贺毒素等致病菌毒素ELISA定量检测。整套检测体系线性良好、回收率稳定、特异性强，仪器操作简便，数据自动采集拟合，大幅缩短食源性毒素筛查周期。该设备能够满足生物科研、食品安全风险监测中批量样品筛查需求，在食源性致病菌毒素快速检测领域具备良好的应用与推广价值。
