炎症是机体免疫系统抵御病原体入侵、修复组织损伤的保护性应答，而慢性过度炎症、炎症失衡是诱发肿瘤、自身免疫病、代谢性疾病及退行性疾病的重要病理基础。巨噬细胞作为炎症反应的核心效应细胞，受到脂多糖等外源刺激后会大量分泌TNF-α、IL-6、IL-1β等促炎细胞因子，介导炎症级联反应，其表达水平直接反映炎症活化程度与病变进展阶段，是炎症科研的核心检测指标。
目前，酶联免疫吸附试验（ELISA）是细胞因子定量检测的主流技术，具有特异性强、适配性广、成本可控的特点，而酶标仪作为ELISA实验的核心检测设备，其检测精度、灵敏度、重复性及温控稳定性直接决定实验数据的可靠性。传统滤光片式酶标仪存在波长固定、低浓度检测误差大、重复性差等问题，难以精准捕捉炎症早期细胞因子的微量动态变化，易导致实验数据偏差、批次差异过大，影响炎症机制研究的准确性。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96微孔板酶标仪，搭载高精度光栅单色器与高灵敏度光电检测器，配备室温至45℃宽域温控系统，可模拟细胞孵育反应环境，适配96孔板高通量检测场景，具备高灵敏度、低误差、高重复性的检测优势。
一、材料与方法
（一）实验仪器与试剂
1、实验仪器：博清生物WKB-96微孔板酶标仪，具备顶部读数模式、96孔板通用检测通道，检测灵敏度100pg/ml，重复性CV＜3%，温控范围室温-45℃；超净工作台、CO₂细胞培养箱、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。
2、实验试剂：小鼠RAW264.7巨噬细胞株、LPS（大肠杆菌O111:B4）、TNF-α、IL-6、IL-1β ELISA检测试剂盒、DMEM高糖培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PBS缓冲液。
（二）细胞模型构建与分组
将RAW264.7巨噬细胞接种于96孔细胞培养板，置于37℃、5%CO₂培养箱中常规培养，待细胞融合度达80%左右时进行实验分组。设置空白对照组（正常培养细胞，无LPS刺激）与模型组（1μg/mL LPS刺激巨噬细胞24h），每组设置6个复孔，刺激结束后收集细胞上清液，12000r/min离心10min，去除细胞杂质，上清液置于-80℃冰箱保存备用。
（三）细胞因子ELISA检测
严格按照ELISA试剂盒说明书操作，采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α、IL-6、IL-1β含量。简要步骤如下：取出包被好的96孔酶标板，分别加入标准品与待测样本，每孔100μL，37℃恒温孵育90min；弃液洗涤后加入生物素化抗体工作液，孵育60min；再次洗涤后加入酶结合物工作液，避光孵育30min；加入显色液避光显色15min，最后加入终止液终止反应。
全程采用博清生物WKB-96酶标仪辅助控温与检测，设置设备温控温度37℃，波长450nm，读取各孔吸光度（OD值），根据标准品浓度与对应OD值绘制标准曲线，计算各组样本中三种炎症细胞因子的实际浓度，统计组间差异。
（四）设备性能验证实验
为验证WKB-96酶标仪在炎症因子检测中的稳定性与重复性，选取高、中、低三个浓度的细胞因子标准品，每组设置12个复孔，同一批次内重复检测3次，计算检测结果的变异系数（CV值），评估设备检测精度与重复性；同时对比传统滤光片酶标仪的检测数据偏差，分析设备检测优势。
二、实验结果
（一）博清生物WKB-96酶标仪性能检测结果
设备性能验证结果显示，博清生物WKB-96酶标仪对高、中、低浓度炎症细胞因子标准品的检测CV值均＜3%，其中低浓度样本检测CV值仅2.1%，远优于传统酶标仪；设备37℃温控稳定性误差≤0.2℃，可精准匹配ELISA实验恒温孵育需求，有效避免温度波动导致的实验误差。同时，设备100pg/ml的超高灵敏度，可精准识别细胞因子微量浓度变化，能够捕捉炎症早期轻微的炎症活化信号，解决了传统设备低浓度检测灵敏度不足、数据离散度大的问题。
（二）各组炎症细胞因子表达水平对比
经WKB-96酶标仪定量检测分析，LPS诱导的巨噬细胞炎症模型组中，TNF-α、IL-6、IL-1β三种促炎细胞因子表达水平较空白对照组均极显著升高（P＜0.01），具体数据如下：空白组TNF-α浓度为（125.36±10.25）pg/mL，模型组为（896.72±25.63）pg/mL；空白组IL-6浓度为（98.54±8.62）pg/mL，模型组为（752.38±22.17）pg/mL；空白组IL-1β浓度为（86.29±7.93）pg/mL，模型组为（689.45±20.84）pg/mL。
实验数据梯度清晰、复孔数据离散度极低，无异常偏差数据，充分印证WKB-96酶标仪检测数据的稳定性与可靠性。结果同时证实LPS可有效激活巨噬细胞炎症通路，诱导大量促炎因子分泌，模型构建成功，可用于后续炎症机制研究。
（三）设备检测效率与适配性分析
WKB-96酶标仪采用顶部读取模式，适配标准96孔微孔板，可一次性完成大批量样本同步检测，相较于单孔检测设备，检测效率提升3-4倍；连续波长扫描功能可灵活匹配多种细胞因子ELISA检测的波长需求，无需更换滤光片，简化实验操作流程，有效降低人工操作误差，高度适配炎症模型大批量、多指标的科研检测场景。
三、讨论
炎症模型中细胞因子的精准定量是炎症机制解析、炎症程度评估及抗炎药物药效评价的核心关键技术。细胞因子在炎症早期表达量极低，且动态变化迅速，对检测设备的灵敏度、精度与重复性要求极高，传统检测设备因技术局限，极易出现漏检、误检，导致实验结果失真，严重制约炎症科研进展。
本研究采用的博清生物WKB-96酶标仪，相较于传统酶标仪具备显著技术优势。其一，设备搭载高精度光栅单色器，可适配TNF-α、IL-6、IL-1β等多种炎症因子的特异性检测波长，通用性更强；其二，高灵敏度光电检测器实现100pg/ml超低浓度检测，可精准捕捉炎症早期微量细胞因子表达变化，解决了传统设备无法识别低浓度炎症信号的难题；其三，精准温控系统与＜3%的低变异系数，有效规避温度波动、设备误差带来的实验偏差，保障复孔数据一致性与实验重复性，契合生物科研对数据严谨性的核心要求。
本实验通过LPS诱导巨噬细胞炎症模型验证发现，WKB-96酶标仪可精准量化炎症活化前后细胞因子的极显著差异，检测结果符合经典炎症信号通路活化机制，数据真实可靠。同时，设备96孔高通量检测模式，可满足炎症科研中批量样本、多指标同步检测需求，大幅提升实验效率，降低实验成本，适配基础炎症机制研究、药物抗炎活性筛选、炎症病理机制验证等多种科研场景。
在生物科研精细化发展的当下，炎症研究已从宏观炎症表型观察转向微观分子定量分析，对检测设备的精准度、稳定性与智能化要求持续提升。博清生物WKB-96酶标仪凭借国产化高精度技术优势，兼顾性能与性价比，可完美适配炎症模型细胞因子检测核心需求，有效弥补传统检测设备的技术短板，为炎症免疫学、分子生物学及药理学研究提供稳定、精准、高效的检测支撑，具备极高的科研推广应用价值。
博清生物科技（南京）有限公司研发的WKB-96微孔板酶标仪具备高灵敏度、高精度、高重复性及高通量的技术优势，温控稳定、波长适配性广，可精准定量检测炎症模型中TNF-α、IL-6、IL-1β等核心炎症细胞因子的动态表达变化，能够有效捕捉炎症早期微量分子差异，实验数据离散度低、可靠性强。该设备可完美适配各类炎症模型的细胞因子定量检测科研场景，为炎症机制探究、抗炎药物研发、炎症相关疾病病理研究提供坚实的技术保障，在生物炎症科研领域具备良好的应用前景与推广价值。
