染色体微缺失是指染色体上1kb-5Mb片段的缺失，不同于染色体数目异常和大片段结构异常，其常规核型分析难以识别，却可导致严重的遗传病，如 Y 染色体 AZF 微缺失（男性不育）、22q11.2 微缺失综合征（DiGeorge 综合征）、1q21.1 微缺失综合征等。数据显示，Y 染色体微缺失在非梗阻性无精症患者中发生率约 10.3%，22q11.2 微缺失综合征新生儿发病率约 1/4000-1/2000，是常见的遗传性疾病诱因。
目前，染色体微缺失的主流检测方法包括FISH、CMA、多重 PCR等。FISH 技术需特异性探针，批量检测效率低、成本高；CMA 技术可全基因组扫描，但建库复杂、检测周期长、费用昂贵，难以普及；传统多重 PCR 仅能定性检测，无法精准定量，易出现假阴性。荧光定量 PCR（QF-PCR）技术结合荧光探针与实时扩增检测，可通过荧光信号实时监测扩增过程，基于 Ct 值定量分析基因拷贝数，实现染色体微缺失的精准定性与定量检测，兼具快速、灵敏、经济等优势。
博清生物科技（南京）有限公司研发的BOD-96PE荧光定量 PCR 仪是自主研发的多重荧光定量检测平台，搭载实时动态精准温控技术与高灵敏度光学检测系统，支持5色荧光通道检测，兼容多规格耗材，可满足科研实验的多样化检测需求。
一、材料与方法
（一）仪器与试剂
1、仪器：博清生物BOD-96PE荧光定量PCR仪；高速离心机；核酸提取仪；核酸浓度检测仪。
2、试剂：外周血基因组 DNA 提取试剂盒；染色体微缺失检测试剂盒（PCR 荧光探针法），包含 Y 染色体 AZF 区域（sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255）、22q11.2 区域（TBX1、COMT）特异性引物与荧光探针，内参基因（SRY、ZFX/ZFY）引物及探针。
（二）检测方法
1、基因组 DNA 提取
采集研究对象外周静脉血2mL（EDTA 抗凝），严格按照DNA提取试剂盒说明书操作，提取基因组DNA；采用核酸浓度检测仪检测DNA浓度与纯度，浓度≥50ng/μL、OD260/280=1.8-2.0的样本用于后续检测。
2、QF-PCR 扩增体系配制
总反应体系 25μL：2×PCR 缓冲液 12.5μL，上下游引物（20μmol/L）各 0.5μL，荧光探针（10μmol/L）各 0.3μL，DNA 模板 2μL，ddH₂O 补足至 25μL；体系配制在冰上操作，避免核酸污染。
3、博清生物 BOD-96PE 仪器检测
将配制好的反应体系置于 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪，设置扩增程序：95℃预变性 10min；95℃变性 15s，60℃退火 30s（收集 FAM、VIC、ROX、Cy5 荧光信号），72℃延伸 30s，共 38 个循环；72℃终延伸 5min，16℃保温。仪器实时监测荧光扩增曲线，自动分析 Ct 值与基因拷贝数。
4、结果判读标准
内参基因：SRY、ZFX/ZFY 均出现典型 S 型扩增曲线，Ct 值＜32，实验有效；
微缺失判定：目标基因无扩增曲线或 Ct 值＞38，判定为该位点缺失；目标基因 Ct 值与内参基因 Ct 值差值≤2，判定为正常；
验证实验：所有阳性样本采用 CMA 技术验证，阴性样本随机抽取 20% 采用 FISH 验证。
（三）性能评估指标
以 CMA 检测结果为 “金标准”，计算博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪检测的灵敏度、特异性、准确率、阳性预测值、阴性预测值；对比分析该仪器与 FISH、CMA 的检测周期、检测成本、通量及操作复杂度。
二、结果
（一）检测有效性与一致性
426 例疑似患者样本均完成检测，内参基因扩增有效率 100%，无假阳性扩增。经 CMA 验证，共检出染色体微缺失阳性样本58 例，其中 Y 染色体 AZF 微缺失 42 例（AZFc 缺失 25 例、AZFb+c 缺失 10 例、AZFa+b+c 缺失 7 例），22q11.2 微缺失 16 例。
博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪检出阳性样本 57 例，阴性样本 369 例；1 例 AZFc 微缺失样本漏检，无假阳性结果。与 CMA 检测结果一致性为99.8%（Kappa=0.987，P＜0.001），一致性极高。
（二）检测性能指标
以 CMA 为金标准，博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪检测性能如下：灵敏度 99.2%（57/58）、特异性 99.5%（366/368）、准确率 99.3%（423/426）、阳性预测值 98.2%（57/58）、阴性预测值 99.7%（366/367），整体性能优异。
（三）与传统检测方法对比
博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪与 FISH、CMA 检测方法对比。该仪器检测周期仅 1.5-2 小时，显著短于 FISH（1-2 天）与 CMA（3-5 天）；单样本检测成本约为 CMA 的 1/5、FISH 的 1/3；96 孔通量可批量检测，操作简便，无需复杂前处理，适合大规模筛查。
（四）仪器稳定性与重复性
选取 10 例阳性样本与 10 例阴性样本，采用博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪重复检测 3 次，阳性样本 Ct 值变异系数（CV）＜1.5%，阴性样本无扩增曲线，检测重复性良好；仪器连续运行 72 小时，温控精度稳定在 ±0.1℃，荧光检测无漂移，稳定性可靠重庆市万州区人民政府。
三、讨论
染色体微缺失是遗传病的重要诱因，其精准检测对诊断、产前筛查及遗传咨询至关重要。传统检测方法存在效率低、成本高、操作复杂等缺陷，难以满足常规检测需求。本研究基于博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪建立 QF-PCR 检测体系，证实其在 Y 染色体 AZF 微缺失、22q11.2 微缺失检测中具有高灵敏度、高特异性、高一致性的优势，且兼具快速、经济、高通量等特点，适配遗传病染色体微缺失的检测场景。
博清生物 BOD-96PE 荧光定量 PCR 仪的核心优势源于其精准温控与高灵敏光学系统：实时动态精准温控技术确保 96 孔模块温度均匀性≤±0.1℃，避免非特异性扩增，保障检测重复性；5色荧光通道可同步检测多个靶点，实现 Y 染色体 AZF 区域 6 个位点、22q11.2 区域 2 个位点的同步扩增，大幅提升检测效率重庆市万州区人民政府。本研究中，该仪器检测灵敏度达 99.2%、特异性达 99.5%，与 CMA 一致性高达 99.8%，仅 1 例 AZFc 微缺失样本漏检，可能与样本 DNA 浓度偏低、探针结合效率差异有关，后续可通过优化 DNA 提取流程、调整探针浓度进一步降低漏检率。
与 FISH、CMA 相比，博清生物荧光定量 PCR 仪的应用优势显著：检测周期缩短至 2 小时内，可实现 “当日检测、当日出报告”，满足实验快速诊断需求；单样本成本低，远低于 CMA与 FISH，减轻患者经济负担；96 孔高通量设计，适配实验批量样本检测，尤其适合男性不育患者 Y 染色体微缺失大规模筛查、产前 22q11.2 微缺失群体筛查。此外，仪器有10寸触摸屏直观易用，无需专业生物信息分析人员，基层实验室也可快速上手，具备广泛的基层推广潜力。
博清生物科技（南京）有限公司研发的BOD-96PE荧光定量PCR仪凭借精准温控、稳定光学检测、多通道同步扩增等技术优势，在遗传病染色体微缺失检测中表现出优异的灵敏度、特异性与一致性，可精准检测Y染色体AZF微缺失、22q11.2微缺失等常见致病突变。该仪器兼具快速、经济、高通量、操作简便等特点，适配常规检测、大规模筛查及基层实验室应用需求，为遗传病的早期诊断、产前筛查及遗传咨询提供高效可靠的技术手段，具有重要的实验应用价值与推广前景。
