肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病，抗肿瘤药物研发始终是生命科学与医学领域的研究热点。体外肿瘤细胞增殖抑制实验通过量化药物对肿瘤细胞生长的抑制作用，快速筛选候选药物、评估药效强度，是药物进入体内实验前的关键环节。
目前，基于细胞代谢活性的CCK-8法因操作简便、灵敏度高、结果稳定，成为细胞增殖与毒性检测的主流方法。该方法的核心是通过酶标仪检测活细胞还原WST-8试剂生成的甲臜产物吸光度，间接反映活细胞数量。博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪具备精准的波长控制、高信噪比检测能力与96孔板兼容设计，可高效完成高通量样本检测，为肿瘤细胞增殖抑制实验提供可靠的技术保障。
一、材料与方法
（一）实验材料
1、细胞系：人非小细胞肺癌A549细胞。
2、主要试剂：DMEM高糖培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素-链霉素双抗溶液、胰蛋白酶-EDTA消化液、CCK-8试剂盒、顺铂（DDP）、二甲基亚砜（DMSO）。
3、主要仪器：博清生物酶标仪、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、96孔细胞培养板、多通道移液器。
（二）细胞培养
A549细胞培养于含10% FBS、1%双抗的DMEM完全培养基中，置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中培养。每2-3天传代1次，取对数生长期细胞用于实验。
（三）实验分组与处理
1、细胞接种：将对数生长期A549细胞消化、计数，调整细胞密度至5×10⁴个/mL，以每孔100μL接种于96孔板，边缘孔加入100μL PBS防止蒸发。置于培养箱孵育24h，待细胞完全贴壁。
2、药物处理：设置空白对照组（仅培养基，无细胞）、阴性对照组（含细胞+DMSO溶剂）、实验组（含细胞+不同浓度顺铂）。顺铂用DMSO溶解，培养基稀释为0.1、0.5、1、5、10、20μmol/L 6个浓度梯度，每孔加入100μL含药培养基，每组设6个复孔。继续培养48h。
（四）CCK-8检测与博清生物酶标仪操作
1、药物处理48h后，每孔加入10μL CCK-8试剂，轻轻摇匀避免气泡，置于培养箱避光孵育2h。
2、孵育结束后，立即将96孔板放入博清生物酶标仪，选择450nm波长检测各孔OD值，仪器自动记录数据。
二、结果
（一）博清生物酶标仪检测OD值结果
博清生物酶标仪检测显示，空白组OD值稳定在0.05-0.08，阴性对照组OD值为1.12±0.06，表明细胞贴壁良好、代谢活性正常。随着顺铂浓度升高，实验组OD值逐渐降低，呈明显浓度依赖性。
（二）药物浓度-抑制率曲线与IC₅₀计算
以顺铂浓度对数为横坐标，增殖抑制率为纵坐标，通过博清生物酶标仪导出数据绘制曲线，结果显示顺铂对A549细胞增殖抑制效应呈典型S型剂量-效应关系。经计算，顺铂对A549细胞的IC₅₀值为3.26±0.15μmol/L，表明其具有较强的体外抗肿瘤增殖活性。
（三）博清生物酶标仪检测性能验证
实验重复3次，博清生物酶标仪检测的组内变异系数（CV）均<5%，组间 CV<8%，说明仪器检测稳定性高、重复性好，可有效降低实验误差，确保数据可靠性。
三、讨论
（一）博清生物酶标仪在实验中的核心优势
本研究结果证实，博清生物酶标仪在肿瘤细胞增殖抑制实验中具有显著应用优势：
1、高灵敏度检测：仪器可精准检测低至0.01的OD值差异，能捕捉低浓度药物对细胞的微弱抑制效应，尤其适用于早期药物筛选与弱活性化合物评价。
2、稳定光学系统：450nm波长检测精准，光源稳定性强，避免因波长偏移或光强波动导致的结果误差，确保多次实验数据一致性。
3、高通量兼容：支持96孔板快速检测，单块板检测时间<1分钟，可满足大规模药物筛选需求，大幅提升实验效率。
4、数据自动处理：配套软件可直接导出OD值、自动计算存活率与抑制率，简化数据整理流程，减少人为误差。
（二）实验方法优化与意义
本研究采用CCK-8法结合博清生物酶标仪，相比传统 MTT 法更具优势：CCK-8产物水溶性好，无需DMSO溶解步骤，操作更简便；对细胞毒性小，可延长孵育时间获取更稳定信号；线性检测范围更宽，适配不同密度细胞样本。该方法与博清生物酶标仪结合，构建了标准化、高效的肿瘤细胞增殖抑制实验体系，可广泛应用于化疗药物、靶向药物、天然产物等多种类型抗肿瘤候选药物的体外筛选与药效评价。
博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪凭借高灵敏度、高稳定性与高通量检测能力，可精准、高效地完成肿瘤细胞增殖抑制实验的OD值检测与数据处理。本研究通过CCK-8法验证，顺铂对A549细胞增殖具有显著浓度依赖性抑制作用，IC₅₀为3.26±0.15μmol/L，实验数据可靠、重复性好。博清生物酶标仪为抗肿瘤药物体外筛选、药效评价提供了关键技术支撑，是生物科研领域肿瘤相关研究的理想检测设备。
