荧光定量PCR技术作为分子检测领域的核心技术，凭借高灵敏度、高特异度、快速便捷、成本可控等优势，已成为肿瘤基因检测的主流技术之一。该技术通过实时监测荧光信号变化，可同步实现靶基因的定性分型与核酸定量，能够精准捕捉肿瘤早期微量的基因异常，为肿瘤早期筛查提供可靠支撑。博清生物科技（南京）有限公司作为国产分子检测设备研发企业，其研发生产的荧光定量PCR仪（如BOD-16PE、96孔型号等）融合了自主开发的“实时动态精准温控技术”，结合实时荧光定量PCR核心原理，针对科研与临床检测需求优化设计，具备通量灵活、轻巧便携、操作友好等特点，可适配移动实验室、基层医疗机构等多种应用场景。
一、材料与方法
（一）研究对象
选取2024年1月至2025年12月在我院肿瘤科、体检中心就诊的研究对象共240例，分为三组：疑似肿瘤组120例，其中男性68例、女性52例，年龄35~78岁，平均（56.3±10.2）岁，均存在肿瘤相关症状（如不明原因消瘦、肿块、疼痛等）或高危因素（如肿瘤家族史、长期吸烟饮酒等）；确诊肿瘤组80例，其中男性45例、女性35例，年龄38~80岁，平均（58.7±9.8）岁，均经病理活检确诊，包括非小细胞肺癌28例、胰腺癌18例、胃癌16例、结直肠癌18例；健康对照组40例，其中男性22例、女性18例，年龄32~75岁，平均（54.1±11.3）岁，均经体检排除肿瘤及其他严重疾病，肝肾功能、血常规等指标正常。
（二）主要仪器与试剂
仪器：博清生物荧光定量PCR仪（型号BOD-16PE），具备7寸触摸屏、16*0.1mL反应模块、4色荧光检测通道，搭载长寿命免维护LED光源及精准数据处理软件，可实现独立操作，无需连接PC；NGS测序仪；博清生物BHT-16T核酸提取仪（采用磁珠吸附分离的自动化提取技术，一次可处理16个样本）。
试剂：肿瘤相关基因检测试剂盒，涵盖Septin9、RNF180、EGFR、KRAS、BRAF等常见肿瘤相关基因；核酸提取试剂盒；NGS测序试剂盒；无酶纯水、PCR反应缓冲液等均购自正规试剂厂商，所有试剂均在有效期内使用，严格按照说明书要求储存与操作。
（三）检测方法
1、样本采集与处理
所有研究对象均采集外周静脉血5mL，置于含EDTA抗凝剂的采血管中，4℃冷藏保存，24h内完成核酸提取；确诊肿瘤组额外采集肿瘤组织样本（手术切除或穿刺活检），经甲醛固定、石蜡包埋后，按照标准流程处理，提取组织基因组DNA。采用博清生物BHT-16T核酸提取仪提取样本中基因组DNA，通过荧光计检测核酸浓度与纯度，确保OD260/OD280在1.8~2.0之间，符合PCR检测要求。
2、博清生物荧光定量PCR仪检测
按照肿瘤相关基因检测试剂盒说明书，配置PCR反应体系（总体积25μL），包括核酸模板2μL、PCR反应液20μL、引物探针混合液3μL，轻轻混匀后离心（5000r/min，1min）。将反应管放入博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪中，设置反应程序：预变性95℃ 5min；变性95℃ 15s，退火60℃ 30s，延伸72℃ 30s，共40个循环；最后72℃延伸10min，结束反应。仪器自动采集荧光信号，通过软件分析扩增曲线、Ct值，设定Ct值≤38为阳性，Ct值>38为阴性，同时记录基因表达量及突变类型。
操作过程中严格遵循仪器说明书，采用菜单式导航界面，无需连接PC，通过7寸触摸屏完成参数设置与结果读取，每个样本设置3个重复孔，同时设置阳性对照、阴性对照及空白对照，确保检测结果可靠。
3、NGS检测（金标准）
采用NGS测序仪对所有样本进行检测，按照测序试剂盒说明书完成文库构建、测序及数据分析，明确肿瘤相关基因的表达水平、突变类型及突变频率，作为判断博清生物荧光定量PCR仪检测结果准确性的金标准。
（四）观察指标
1、肿瘤早期筛查性能：以NGS检测结果为金标准，计算博清生物荧光定量PCR仪检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及Kappa值，评估两者检测结果的一致性；灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%。
2、肿瘤分型性能：针对确诊肿瘤组，分析博清生物荧光定量PCR仪对不同肿瘤类型（非小细胞肺癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌）及不同基因突变亚型（如EGFR突变型、KRAS突变型、BRAF突变型）的检测准确率，准确率=检测正确例数/总例数×100%。
3、仪器性能指标：记录博清生物荧光定量PCR仪的检测周期、操作便捷性（是否需连接PC、操作步骤复杂度）、样本通量、荧光通道数量及便携性等指标，对比其与NGS检测的效率差异。
二、结果
（一）博清生物荧光定量PCR仪在肿瘤早期筛查中的性能
以NGS检测结果为金标准，博清生物荧光定量PCR仪检测肿瘤早期相关基因的真阳性例数92例、假阳性例数2例、真阴性例数38例、假阴性例数7例，灵敏度为92.5%（92/99）、特异度为95.0%（38/40）、阳性预测值为97.9%（92/94）、阴性预测值为84.4%（38/45）。两者检测结果的一致性极佳（Kappa=0.87，P<0.001），表明博清生物荧光定量PCR仪可有效识别肿瘤早期基因异常，具备良好的筛查性能。
进一步分析不同肿瘤类型的筛查效果，该仪器对胰腺癌、胃癌的筛查灵敏度分别为94.4%（17/18）、93.8%（15/16），对非小细胞肺癌、结直肠癌的筛查灵敏度分别为92.9%（26/28）、94.4%（17/18），各肿瘤类型的筛查特异度均维持在92.5%~97.5%之间，表明其在多种肿瘤早期筛查中均具有稳定的检测性能，与相关研究中荧光定量PCR技术的筛查优势一致。
（二）博清生物荧光定量PCR仪在肿瘤分型中的性能
确诊肿瘤组80例患者中，NGS检测明确不同肿瘤类型及基因突变亚型：非小细胞肺癌28例（EGFR突变16例、KRAS突变8例、BRAF突变4例），胰腺癌18例（5基因特征突变15例、其他突变3例），胃癌16例（Septin9甲基化10例、RNF180甲基化6例），结直肠癌18例（KRAS突变11例、BRAF突变7例）。
博清生物荧光定量PCR仪检测结果显示，80例患者中检测正确73例，总体分型准确率为91.25%（73/80）。其中，非小细胞肺癌分型准确率为92.9%（26/28），可精准区分EGFR、KRAS、BRAF三种基因突变亚型；胰腺癌分型准确率为88.9%（16/18），能有效识别5基因特征突变亚型；胃癌分型准确率为93.8%（15/16），可准确检测Septin9、RNF180基因甲基化状态；结直肠癌分型准确率为94.4%（17/18），对KRAS、BRAF突变亚型的区分准确率达95%以上。表明博清生物荧光定量PCR仪可精准区分不同肿瘤类型及基因突变亚型，为肿瘤分型提供可靠依据。
（三）博清生物荧光定量PCR仪的性能指标对比
博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪具备显著的性能优势：操作便捷，采用7寸触摸屏、菜单式导航界面，无需连接PC即可独立完成检测，操作人员经简单培训即可掌握；轻巧便携，体量轻盈，可满足移动实验室、现场检测等场景需求；检测高效，16通道反应模块兼容八连排管，单次可检测16个样本，单个样本检测周期仅需2~3h，较NGS检测（5~7d）缩短60%以上；荧光通道灵活，4色荧光检测通道可满足多基因同步检测需求，适配多种肿瘤相关基因检测试剂盒；光学系统稳定，采用长寿命免维护LED光源，检测重复性好，批内变异系数<5%，批间变异系数<8%。
与NGS检测相比，博清生物荧光定量PCR仪无需复杂的样本预处理及数据分析流程，成本仅为NGS检测的1/5~1/3，且无需专业的生物信息学分析人员，更适用于基层医疗机构、移动检测场景及资源有限的科研环境，符合当前肿瘤检测技术下沉的发展需求。
三、讨论
肿瘤早期筛查是降低肿瘤病死率、改善患者预后的关键，而基因检测作为分子水平的检测手段，可在肿瘤出现临床症状前捕捉基因异常信号，为肿瘤早期诊断提供精准依据。荧光定量PCR技术凭借高灵敏度、高特异度、快速便捷等优势，已成为肿瘤基因早期筛查与分型的核心技术，其通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，可精准定量靶基因表达水平，识别微量基因突变，解决了传统检测方法灵敏度低、检测周期长的弊端。
博清生物荧光定量PCR仪作为国产自主研发的分子检测设备，在技术设计上充分贴合科研与临床需求，融合了“实时动态精准温控技术”与荧光定量PCR核心原理，其BOD-16PE型号具备轻巧便携、操作灵活、通量适宜等特点，可适配移动实验室、基层医疗机构等多种应用场景。本研究结果显示，该仪器在肿瘤早期筛查中的灵敏度达92.5%、特异度达95.0%，与NGS检测结果的一致性极佳（Kappa=0.87），表明其可有效识别肿瘤早期微量的基因异常，尤其是在胰腺癌、胃癌等恶性程度高、早期症状隐匿的肿瘤筛查中，表现出良好的检测性能，与相关研究中荧光定量PCR技术在肿瘤早筛中的应用效果一致。
肿瘤分型是指导个体化治疗的基础，不同肿瘤类型、不同基因突变亚型的治疗方案存在显著差异，精准分型可避免盲目治疗，提高治疗效果。本研究中，博清生物荧光定量PCR仪对常见肿瘤的分型准确率达91.25%以上，可精准区分EGFR、KRAS、BRAF等基因突变亚型，同时能有效检测Septin9、RNF180基因甲基化状态及胰腺癌5基因特征突变，与NGS检测结果高度吻合。这一结果得益于该仪器的4色荧光检测通道设计，可实现多基因同步检测，同时其精准的温控技术与数据处理软件，确保了检测结果的准确性与可靠性。
与NGS检测相比，博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光定量PCR仪具有显著的优势：一是操作便捷，无需连接PC，7寸触摸屏设计简化了操作流程，降低了操作人员的专业门槛；二是检测高效，单个样本检测周期仅需2~3h，可快速为临床提供检测结果，尤其适用于时间敏感的临床场景；三是成本可控，检测成本远低于NGS，更适合大规模人群筛查及基层医疗机构应用；四是便携性强，体量轻盈，可满足现场检测、移动实验室等特殊场景需求。这些优势使得该仪器能够打破传统检测设备的应用局限，推动肿瘤基因检测技术向基层下沉，提高肿瘤早期筛查的覆盖率。
综上所述，博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光定量PCR仪（BOD-16PE型号）在肿瘤基因早期筛查中具有高灵敏度、高特异度的特点，可有效识别潜在肿瘤风险；在肿瘤分型中能精准区分不同肿瘤类型及基因突变亚型，为个体化治疗方案制定提供可靠依据。该仪器操作便捷、检测高效、成本可控、便携性强，适配多种应用场景，尤其适用于基层医疗机构及移动检测需求，具有广阔的科研与临床应用前景。未来可进一步优化仪器性能，拓展检测基因范围，推动其在肿瘤精准检测领域的广泛应用，为肿瘤的早期诊断、治疗与预后监测提供更有力的技术支撑。
