RNA作为基因表达与调控的核心载体，其浓度与完整性是下游分子实验的核心质控指标。在基因表达分析、病毒核酸检测、mRNA疫苗研发、单细胞测序等场景中，低丰度、微量 RNA 样本的精准定量尤为重要。
紫外分光光度法通过A260吸光度计算RNA浓度，无法区分RNA与DNA、蛋白质等杂质，检测下限通常仅达1ng/μL，难以满足微量样本需求。荧光定量法采用仅与RNA结合后才发射强荧光的特异性染料，信号强度与RNA浓度呈严格线性关系，不受非核酸杂质干扰，检测灵敏度可提升10~100倍。
博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光计专为微量核酸与蛋白定量设计，兼容1~20μL微量上样，内置RNA定量标准程序，操作简便、检测快速，适配各类生物样本RNA提取后的快速质控。本研究以该仪器为对象，系统评估其在RNA定量实验中的性能，为科研与检测实验室提供标准化应用方案。
一、材料与方法
（一）实验材料
1、仪器：博清生物荧光计
2、试剂：RNA 高灵敏度荧光定量试剂盒、TE缓冲液（pH7.5）、标准RNA溶液
3、样本：细胞总RNA、组织RNA、血清游离RNA
（二）实验原理
博清生物荧光计采用特异性荧光探针法：探针游离时荧光信号极弱，与RNA分子特异性结合后构象改变，荧光强度显著增强；仪器通过检测荧光信号强度，自动换算RNA浓度，实现高特异性、高灵敏度定量。
（三）实验步骤
1、工作液配制：按试剂盒比例将RNA荧光染料与缓冲液混合，避光配制工作液。
2、标准曲线建立：取梯度稀释的标准RNA，加入工作液混匀，室温避光孵育2~5min，仪器自动校准建立标准曲线。
3、样本检测：取1~5μL RNA 样本，加入工作液至总体积200μL，混匀后上机检测，仪器直接显示浓度值。
4、对比实验：同步采用紫外分光光度法检测相同样本，对比两种方法的准确性与抗干扰性。
二、结果与分析
（一）线性范围与灵敏度
在0.1~100ng/μL浓度范围内，RNA标准品的荧光强度与浓度呈现良好线性关系，相关系数R²＞0.999，最低检测限低至0.1ng/μL，可满足微量/低丰度RNA定量需求。
（二）重复性与稳定性
对同一RNA样本重复检测10次，变异系数CV＜1.5%；室温避光放置1h内检测结果无显著偏差，仪器稳定性优异，适合批量样本检测。
（三）抗干扰性能
在含蛋白质、盐离子、DNA等常见杂质的模拟样本中，紫外法检测结果偏差达 20%~50%，博清生物荧光计检测结果偏差＜3%，特异性显著优于传统方法。
（四）微量样本适配性
仅需1μL样本即可完成精准检测，大幅节约珍贵的临床样本、单细胞裂解液、微量提取RNA等稀缺材料。
三、讨论
博清生物荧光计在RNA定量中呈现三大核心优势：
高特异性：染料仅靶向结合RNA，有效排除DNA、蛋白、杂质干扰，结果更真实。
高灵敏度：检测下限低至0.1ng/μL，适配微量、低丰度RNA样本。
微量快速：1~20μL 上样量，5min 内完成单样本检测，支持批量高效质控。
与紫外分光光度法相比，该仪器更适合转录组测序、qPCR、mRNA制备、病毒RNA检测等对RNA定量精度要求高的实验场景，可显著降低因RNA定量不准导致的下游实验失败风险。
博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光计基于特异性荧光定量原理，在RNA定量实验中表现出线性好、灵敏度高、重复性强、抗干扰、微量快速等优良性能，可精准完成总RNA、mRNA、small RNA等多种RNA样本定量。该仪器操作简便、结果可靠，是实验室核酸与蛋白定量、分子实验质控的理想设备，为生命科学研究与核酸检测提供稳定、高效的技术支撑。
