肝细胞癌是全球范围内高发的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均位居恶性肿瘤前列，严重威胁人类生命健康。早期诊断与干预是改善肝癌患者预后的关键，但肝癌早期症状隐匿，传统影像学检查对微小病灶的检出率有限，因此依赖肿瘤标志物的血清学筛查成为肝癌早期发现的重要手段。酶联免疫吸附实验（ELISA）是肿瘤标志物检测的常用方法，其检测效能直接依赖于酶标仪的性能，优质的酶标仪可实现对微量生物标志物的精准定量，为疾病诊断提供可靠依据。
目前临床常用的肝癌相关肿瘤标志物包括甲胎蛋白（AFP）、高尔基体蛋白73（GP73）等，但单一标志物检测存在灵敏度或特异性不足的问题，联合检测已成为提升诊断效能的主流趋势。LAPTM4B-35是新发现的肿瘤驱动基因编码蛋白，在肝癌组织中高表达，且可通过外排体形式释放至血液中，有望成为肝癌诊断的新型标志物。博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪作为国产自主研发的检测设备，具备多检测模式、高灵敏度等特点，但其在肝癌相关肿瘤标志物检测中的应用价值尚未明确。
一、材料与方法
（一）研究对象
选取肝细胞癌患者43例（肝癌组），均经病理活检确诊，其中男性32例，女性11例，年龄45~72岁，平均（58.6±8.3）岁；同期收治的肝硬化患者34例（肝硬化组），男性25例，女性9例，年龄42~70岁，平均（56.3±7.9）岁；选取同期健康体检者33例作为健康对照组，男性23例，女性10例，年龄40~68岁，平均（55.1±7.5）岁。排除合并其他恶性肿瘤、严重心肾疾病及免疫功能缺陷者。三组研究对象性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
（二）主要仪器与试剂
仪器：博清生物酶标仪，配备吸光度检测模块；对照仪器酶标仪。试剂：LAPTM4B-35 ELISA检测试剂盒，AFP ELISA检测试剂盒，GP73 ELISA检测试剂盒，所有试剂均在有效期内使用。其他试剂包括：0.05mol/L碳酸盐包被缓冲液（pH9.6），含3% BSA的PBS封闭液（pH7.4），含0.05% Tween-20的PBS洗板液（pH7.4），0.1 mol/L柠檬酸-磷酸盐底物缓冲液（pH5.0），4mol/L H₂SO₄终止液。
（三）实验方法
1、样本处理 采集所有研究对象空腹静脉血5mL，3000r/min离心10min分离血清，置于-80℃冰箱冻存待测，避免反复冻融。
2、检测流程 严格按照各ELISA试剂盒说明书及博清生物酶标仪操作手册进行检测。核心步骤如下：①包被：将特异性抗体加入96孔酶标板，4℃孵育过夜，洗板3次；②封闭：加入封闭液，37℃孵育1h，洗板3次；③加样：分别加入待测血清、标准品及空白对照，37℃孵育1.5h，洗板5次；④加酶标二抗：加入对应酶标记抗体，37℃孵育1h，洗板5次；⑤显色：加入底物溶液，37℃避光孵育15~20min；⑥终止：加入终止液终止反应；⑦检测：使用博清生物酶标仪在对应波长下测定各孔吸光度（OD值），根据标准曲线计算样本中各标志物浓度。
3、仪器性能验证 选取高、中、低三个浓度的标准品，每个浓度设置6个复孔，用博清生物酶标仪连续检测3天，计算批内及批间变异系数（CV），评估检测精密度。同时采用对照仪器酶标仪对同一批血清样本进行平行检测，分析两种仪器检测结果的相关性。
二、结果
（一）三组研究对象血清肿瘤标志物水平比较
肝癌组血清LAPTM4B-35、AFP及GP73水平均显著高于肝硬化组及健康对照组，差异均有统计学意义（均P<0.01）；肝硬化组各标志物水平高于健康对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。
（二）单一肿瘤标志物诊断肝癌的效能
ROC曲线分析显示，LAPTM4B-35诊断肝癌的AUC为0.913，最佳临界值为1.85 ng/mL，对应灵敏度76.7%，特异性87.9%；AFP的AUC为0.865，最佳临界值为25.0 μg/L，灵敏度72.1%，特异性84.8%；GP73的AUC为0.882，最佳临界值为128.5 μg/L，灵敏度74.4%，特异性86.4%。LAPTM4B-35的诊断效能优于AFP及GP73，但差异无统计学意义（P>0.05）。
（三）多肿瘤标志物联合检测诊断肝癌的效能
以“任一标志物阳性”为联合检测阳性判断标准，三者联合检测的AUC达0.968，显著高于各单一标志物（均P<0.05）；对应灵敏度93.0%，特异性89.2%，阳性预测值90.7%，阴性预测值91.8%，诊断准确性为91.5%，均优于单一标志物检测。
（四）博清生物酶标仪性能验证结果
博清生物酶标仪检测高、中、低浓度标准品的批内CV为2.1%~3.2%，批间CV为3.6%~4.5%，均满足临床检测要求（CV≤5%）。与对照仪器酶标仪检测结果比较，LAPTM4B-35、AFP及GP73的检测结果均呈高度正相关（r分别为0.972、0.965、0.958，均P<0.01），表明博清生物酶标仪检测结果准确可靠。
三、讨论
肝癌早期筛查是降低死亡率的关键，血清肿瘤标志物检测因操作简便、无创等优势在临床广泛应用，但单一标志物诊断效能有限，且检测仪器的性能直接影响结果可靠性。本研究聚焦博清生物酶标仪，系统评估其在多肿瘤标志物检测中的应用价值，为肝癌筛查提供新的技术选择。
LAPTM4B-35作为新型肿瘤标志物，其在肝癌组织中高表达，且可通过外排体释放至血液，为血清学检测提供了可能。本研究发现，肝癌组血清LAPTM4B-35水平显著高于肝硬化组及健康对照组，其诊断肝癌的AUC达0.913，灵敏度和特异性均优于传统的AFP，提示LAPTM4B-35在肝癌筛查中具有良好的应用前景。这与北京大学基础医学院的研究结论一致，进一步证实了该标志物的诊断价值。
联合检测是提升肿瘤诊断效能的有效策略。本研究中，LAPTM4B-35、AFP及GP73联合检测的AUC达0.968，灵敏度提升至93.0%，显著优于单一标志物检测，这与既往多肿瘤标志物联合检测的研究结果相符。联合检测可互补各标志物的不足，减少漏诊和误诊，尤其适用于早期肝癌及AFP阴性肝癌的筛查，具有重要临床意义。
仪器性能是保证检测结果可靠的基础。本研究验证了博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪的检测精密度，其批内及批间CV均低于5%，符合临床检测标准；与对照仪器酶标仪检测结果高度相关，表明其检测准确性良好。博清生物酶标仪基于光电比色法原理，可精准检测ELISA反应产生的颜色变化，通过标准曲线实现定量分析，具备多波长检测能力，可适配不同肿瘤标志物的检测需求，且操作简便、成本相对较低，更适合基层医疗机构及大规模筛查应用。
本研究存在一定局限性：样本量相对较小，且为单中心研究，结果可能存在偏倚；未探讨标志物水平与肝癌病理分期、预后的相关性。未来需扩大样本量开展多中心研究，进一步验证联合检测方案的长期应用价值，并结合影像学检查构建更完善的肝癌筛查体系。
综上所述，博清生物科技（南京）有限公司研发的酶标仪具有良好的检测精密度与准确性，采用该仪器联合检测LAPTM4B-35、AFP及GP73可显著提升肝癌筛查的效能，为肝癌早期诊断提供可靠依据，具备广阔的临床推广应用前景。
