肿瘤的发生发展是多基因、多步骤的复杂过程，驱动基因突变（如EGFR、KRAS、BRAF 等）及循环肿瘤DNA（ctDNA）的动态变化，是反映肿瘤负荷、治疗应答及复发风险的核心分子标志物。实时荧光定量PCR（qPCR）技术凭借高灵敏度、高特异性、快速定量及低成本的优势，已成为肿瘤分子检测的主流手段。博清生物科技（南京）有限公司研发的BOD-16PE荧光定量PCR仪，搭载自主研发的实时动态精准温控技术与4色荧光检测通道，兼容八连排管，具备高通量、快速检测能力，适配移动实验室及快速检测场景。
一、材料与方法
（一）研究对象
选取2024年1月—2025年12月在我院肿瘤科收治的120例实体瘤患者，其中非小细胞肺癌68例、结直肠癌52例；男性72例，女性48例；年龄38—75岁，平均年龄（56.3±8.7）岁。纳入标准：①经病理组织学确诊为NSCLC或结直肠癌；②接受靶向治疗、化疗或免疫治疗；③治疗前及治疗后各时间点可获取外周血及肿瘤组织样本；④资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②存在严重肝肾功能障碍；③样本采集前接受过放疗。
（二）主要仪器与试剂
1、仪器：博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪（4色荧光通道，7寸触控屏，16×0.1mL反应模块）；核酸提取仪（博清生物，磁珠法）；超微量分光光度计；高通量测序仪。
2、试剂：肿瘤驱动基因（EGFR 19del、L858R，KRAS G12D，BRAF V600E）TaqMan探针法qPCR试剂盒；ctDNA 提取试剂盒；SYBR Green Master Mix；内参基因GAPDH引物及探针。
（三）样本采集与处理
1、肿瘤组织样本：治疗前通过手术或穿刺获取肿瘤组织及癌旁正常组织，液氮速冻后- 80℃保存，用于提取基因组DNA。
2、外周血样本：分别于治疗前、治疗后2周、4周、8周采集患者外周静脉血5mL，EDTA抗凝，4℃离心分离血浆，采用磁珠法提取ctDNA，超微量分光光度计检测DNA浓度与纯度（A260/A280=1.7—2.0），合格样本用于后续检测。
（四）荧光定量PCR检测
采用博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪，严格按照试剂盒说明书操作。反应体系为20μL：2×qPCR Mix 10μL，上下游引物（10μmol/L）各0.4μL，探针（10μmol/L）0.4μL，DNA模板2μL，无酶水补足至20μL。反应条件：95℃预变性10min；95℃变性15s，60℃退火延伸60s，共40个循环。每个样本设3个复孔，以GAPDH为内参基因，采用2^(-ΔΔCt) 法计算目的基因相对表达量；通过标准曲线法计算ctDNA突变丰度。
二、结果
（一）博清生物 qPCR 检测性能验证
以NGS为金标准，博清生物BOD-16PE检测120例患者肿瘤驱动基因突变的结果显示：真阳性111例，真阴性116例，假阳性4例，假阴性9例；灵敏度92.5%（111/120），特异度96.7%（116/120），阳性预测值96.5%（111/115），阴性预测值92.8%（116/125）；两种检测方法的一致性Kappa值为0.89（P<0.001），提示博清生物qPCR检测结果与NGS高度一致，检测性能可靠。
（二）治疗前后肿瘤基因表达及ctDNA突变丰度变化
治疗前，所有患者肿瘤组织中EGFR、KRAS、BRAF基因表达水平及血浆ctDNA突变丰度均显著高于癌旁组织（P<0.01）。治疗后，治疗有效组（CR+PR，72例）患者的驱动基因表达水平及 ctDNA 突变丰度随治疗进程持续下降，治疗后8周较治疗前分别下降（78.3±12.5）%、（82.6±10.8）%（P<0.01）；治疗无效组（SD+PD，48例）患者的上述指标则呈持续升高趋势，治疗后8周较治疗前分别升高（45.2±15.3）%、（51.7±13.6）%（P<0.05）。两组间各时间点指标对比差异均具有统计学意义（P<0.01）。
（三）qPCR检测结果与疗效的相关性
博清生物qPCR检测的ctDNA突变丰度及驱动基因表达水平，与患者疗效呈显著负相关（r=-0.82，P<0.001；r=-0.79，P<0.001）。在治疗后4周，qPCR检测结果预判治疗有效率达87.5%，较传统影像学检查（CT/MRI）提前4—6周发现肿瘤治疗应答变化；治疗后8周，qPCR检测结果与RECIST疗效评估的符合率达94.2%，可精准区分治疗有效与无效患者。
（四）仪器操作与检测效率
博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪采用7寸触控屏，菜单式导航界面，无需连接PC即可独立完成检测，操作便捷易学。单次检测可同时处理16个样本，单个样本检测时长约60min，较传统qPCR仪缩短20%—30%，适配批量样本快速检测需求；4色荧光通道可实现多基因同步检测，进一步提升检测通量与效率。
三、讨论
（一）博清生物qPCR仪在肿瘤基因检测中的技术优势
本研究结果证实，博清生物BOD-16PE荧光定量PCR仪在肿瘤驱动基因及ctDNA检测中表现出优异的性能，其高灵敏度（92.5%）与高特异度（96.7%），可精准识别低丰度肿瘤基因突变，满足微量样本检测需求。该仪器搭载的实时动态精准温控技术，确保PCR扩增效率与特异性，减少非特异性扩增；4色荧光通道支持多靶点同步检测，可同时分析多个肿瘤驱动基因，为肿瘤分子分型与疗效评估提供更全面的分子信息。此外，其便携、高通量的设计，适配移动实验室、生物安全柜等多种场景，适合基层机构及科研团队开展肿瘤分子检测工作。
（二）qPCR检测在肿瘤疗效评估中的价值
肿瘤治疗的核心目标是精准监测肿瘤负荷变化，及时调整治疗方案。传统影像学检查（如CT、MRI）仅能反映肿瘤形态学变化，难以早期发现微小残留病灶（MRD）及治疗应答。本研究中，博清生物qPCR检测的ctDNA突变丰度及驱动基因表达水平，可动态反映肿瘤细胞的增殖与凋亡状态，提前4—6周预判肿瘤治疗应答，为及时更换治疗方案、避免无效治疗提供关键依据。同时，ctDNA作为非侵入性分子标志物，可通过外周血反复检测，实现肿瘤疗效的动态、连续监测，弥补组织样本获取困难的缺陷，尤其适合晚期肿瘤患者的疗效评估。
博清生物科技（南京）有限公司研发的BOD-16PE荧光定量PCR仪凭借高灵敏度、高特异性、快速定量及便捷操作的优势，可精准检测肿瘤驱动基因突变及ctDNA动态变化，其检测结果与疗效高度相关，能早期、动态评估肿瘤治疗应答，为肿瘤个体化治疗的疗效监测、预后判断及方案调整提供可靠的分子技术支撑。该仪器适合科研场景下肿瘤基因检测与疗效评估的广泛应用，具有重要的推广价值。
